Příloha č. 4 k vyhlášce č. 376/2000 Sb.

Metody kontroly hodnot vybraných ukazatelů
a parametry metod stanovených ukazatelů

1. Metody kontroly hodnot vybraných ukazatelů

1.1 Koliformní bakterie a Escherichia coli (E. coli) (ISO 9308-1, TNV 75 7835) 
1.2 Enterokoky (ČSN ISO 7899 -1-2)
1.3 Pseudomonas aeruginosa (prEN ISO 12780)
1.4 Vyčíslení kultivovatelných mikroorganismů - počet kolonií při 22°C (ČSN 75 7842, prEN ISO 6222)
1.5 Vyčíslení kultivovatelných mikroorganismů - počet kolonií při 37°C (ČSN 75 7841, prEN ISO 6222)
1.6 Clostridium perfringens (včetně spór) (ČSN EN 26461-1, ČSN EN 26461-2) (ČSN 75 7861) nebo metoda podle bodu 1.6.1
1.6.1 Membránová filtrace, po které následuje anaerobní kultivace membrány na m-CP agaru, při 44 ± 1 °C po dobu 21 ± 3 hodin. Počítá se četnost neprůsvitných žlutých kolonií, jejichž zbarvení přejde do růžova nebo červena po vystavení parám amoniaku po dobu 20 až 30 sekund.

Agar m-CP má toto složení:

Bazální médium		
tryptóza	30 g	
kvasnicový extrakt	20 g	
sacharoza	5 g	
hydrochlorid L-cysteinu	1 g	
MgSO4.7H2O	0,1 g	
bromokrezolová purpurová červeň	40 mg	
agar	15 g	
voda	1 000 ml	

Tyto součásti bazálního média se rozpustí, pH se upraví na 7,6 a médium se na dobu 15 minut umístí v autoklávu při 121 °C. Poté se médium nechá zchladnout a přidají se následující přísady:

D-cykloserin	400 mg	
polymyxin B ve formě síranu	25 mg	
indoxyl-β-D-glukosid (předem rozpuštěný v 8 ml sterilní vody)	60 mg	
sterilně zfiltrovaný 0,5 % fenolftalein difosforečnanový roztok	20 ml	
sterilně zfiltrovaný 4,5 % FeCl3.6H2O	2 ml	

2. Ukazatelé jakosti, pro které jsou stanoveny parametry metod

Použité analytické metody pro stanovení chemických a fyzikálních ukazatelů jakosti, u kterých jsou stanoveny příslušné parametry metod (viz příloha č. 1, část Ostatní podmínky), musí splňovat požadavek, aby byly schopny měřit koncentrace sledovaného ukazatele dané příslušným % limitní hodnoty (10, 25%) a to se shodným minimálním procentem požadované přesnosti a správností. Výsledek se vyjadřuje za použití stejných jednotek a nejméně stejného počtu platných číslic, jako je uvedeno u hodnoty daného ukazatele v příloze č. 1.