Příloha č. 5 k vyhlášce č. 471/2000 Sb.

Část I. PLEMENITBA SKOTU

A.
I.	Postupy získávání, posuzování a zpracování spermatu, uchovávání 
a výdeje inseminačních dávek

1. Odběr spermatu
1.1.Odběr spermatu se provádí podle plánu stanoveného individuálně pro každého býka, po řádném vyčištění býka a omytí a usušení předkožky, pomoci umělé vagíny vyjmuté z termostatu o teplotě cca 40 °C, jejíž vložka je ověřená na nepropustnost vody a vzduchu.

1.2 Všechny pomůcky přicházející bezprostředně do styku se spermatem musí být sterilní.

1.3 Po odběru je sběrač se spermatem, označený značkou a číslem státního registru plemenného býka, oddělen a předán do laboratoře k hodnocení a zpracování. Mikroskopické posouzení čerstvého spermatu se provádí do 10 minut po odběru.

2. Hodnocení spermatu
Hodnocení spermatu se provádí na základě posouzení jednotlivých vlastností spermatu podle charakteristických znaků a projevů metabolizmu při teplotě 20 až 25 °C.

Hodnocení: | hodnotí se: | způsob hodnocení:
čerstvého | zdravotní nezávadnost | nejméně jednou za půl roku veterinárním
spermatu | spermat u odebíraných býků | vyšetřením
| objem | měřením nebo vážením u každého ejakulátu s přesností na1 cm^3 (g)
| barva, konzistence a pach | smyslovým posouzením
| obsah přimísenin | smyslovým posouzením ve sběrači a mikroskopicky
| hustota spermatu | fotometrem u každého ejakulátu (kontrolní propočty
| | případně kalibrace přístrojů se provádějí v Bürkerově komůrce)
| aktivita spermatu | mikroskopicky při zvětšení 1 : 200 až 300 a při
| (u každého ejakulátu) | teplotě 39 ± 1°C, kdy se odhadem zjišťuje
| | procentické zastoupení spermií pohybujících se vpřed za hlavičkou
| výskyt abnormálních spermií | mikroskopicky při zvětšení 1 : 1000 až 1500 a
| | vyjadřuje se v %; u provozních býků nejméně jednou za měsíc
krátkodobě^*) | aktivita spermatu | jako u čerstvého spermatu
uchovávaného | |
spermatu | |
| počet aktivních spermií | v 10 čtvercích v Bürkerově komůrce tak, že
| v inseminační dávce | průměrný počet spermií ve čtverci se přepočte na
| | velikost inseminační dávky a vynásobením počtu všech spermií procentem aktivity se zjistí počet
| | aktivních spermií v inseminační dávce
dlouhodobě^**) | aktivita spermatu | u každého ejakulátu na pracovišti, kde bylo sperma
uchovávaného spermatu | (po rozmrazení) | zmrazeno a dále u každého ejakulátu před expedicí tak, že:
| | - pejeta se rozmrazí ve vodní lázni o teplotě 39 ± 1
| | °C (pejeta o obsahu 0,25 ml za 15-20 vteřin, o
| | obsahu 0,50 ml za 20 až 30 vteřin), její obsah se
| | promíchá a vypustí do zkumavky s roztokem
| | citronanu sodného, aktivita spermií se posuzuje jako u čerstvého spermatu;
| | - peleta se rozpustí v malé zkumavce o teplotě 39 ± 1
| | r°C v roztoku citronanu sodného a promíchá se;
| | aktivita spermií se posuzuje jako u čerstvého spermatu
| počet aktivních spermií | jako u krátkodobě uchovávaného spermatu
| v inseminační dávce |

Poznámky: 
^*) Vzorky jsou odebírány sterilně při teplotě 1 až 3 °C a vyšetřovány bezprostředně po přípravě. 
^**) Vzorky jsou odebírány sterilně při teplotě -196 °C a vyšetřovány bezprostředně po rozmrazení.

3. Zpracovávání spermatu
3.1. Veškeré předměty přicházející do styku se spermatem musí být sterilní.
3.2. Produkty živočišného původu používané při ošetření spermatu musí být zdravotně nezávadně.
3.3. Spermata se ředí při pokojové teplotě 20 až 25 °C; k ředění se používají pouze média, která po konzervaci uchovávají dobrou oplozovací schopnost spermatu a jeho zdravotní nezávadnost; ředí se technologickým postupem podle pokynů výrobce ředidla.
3.4. Do spermatu jsou přidávána antibiotika tak, aby v konečném naředění bylo dosaženo nejméně těchto koncentrací:
na 1 ml ředidla | 500 mj streptomycinu
| 500 mj penicilinu
| 150 Ng linkomycinu
| 300 μg spektinomycinu
Poznámka:
Může být použita i jiná kombinace antibiotik, pokud mají rovnocenný účinek proti kampylobakteriím, leptospirám a mykoplazmám.

3.5. Bezprostředně po přidávání antibiotik je ředěné sperma uchováváno nejméně 45 minut při teplotě 3 - 5°C 

4. Uchovávání a výdej inseminačních dávek

4.1. | Sperma se po zpracování uchovává | a) krátkodobě při teplotě 1 až 3 °C
| | b) dlouhodobě při teplotě -196 °C
4.2 | Krátkodobě uchovávané sperma se vydává z inseminačních stanic podle podmínek daných
| technologickým postupem
4.3. | Dlouhodobě uchovávané inseminační dávky ve formě pejet nebo pelet se ukládají do
| provozního kontejneru, kde jsou trvale ponořeny v tekutém dusíku při teplotě -196 °C. Po
| hodnocení aktivity se inseminační dávky ukládají do zásobního kontejneru a z inseminační
| stanice se expeduje nejdříve po 30 dnech po odběru a zmrazení.
4.4. | Pejety jsou uloženy | a) v zásobních kontejnerech v kelímcích s vatovou zátkou dole; v těchto kelímcích jsou uloženy odděleně podle býků a data odběru s vloženým lístkem, na kterém je uvedena značka a číslo státního registru a jméno býka, datum odběru, počet uložených inseminačních dávek. V případě uložení inseminačních dávek z více skoků do kelímků s menším průměrem je tento údaj napsán nesmazatelnou barvou na vnější straně kelímku. Na expediční list jsou vždy uváděna data jednotlivých skoků, počet inseminačních dávek a státní registr býka,
| | b) v transportních kontejnerech zpravidla v kelímcích o malém průměru, na které se uvádí stejné údaje jako v bodě a) a které jsou vždy naplněny tekutým dusíkem,
4.5. | Pelety jsou uloženy | a) v zásobních kontejnerech v kelímcích, které se ukládají na kovové plošinky v kanystrech a víčka kelímků jsou opatřena třemi až čtyřmi otvory; kelímek je naplněn tak, aby nad peletami bylo asi 7 mm tekutého dusíku,
| | b) v transportních kontejnerech v kovových pouzdrech; nad peletami je kovové závaží, pouzdra jsou uzavřena víčky a všechny pelety jsou trvale ponořeny v dusíku
4.6. | Kontejnery používané- pro skladování a přepravu spermatu jsou náležitě desinfikovány před každým naplněním dusíkem, který nebyl použit pro jiné produkty živočišného původu. Interval desinfekce je dán typem a používáním kontejneru.

B.
Požadavky na kvalitu a identifikaci spermatu a inseminačních dávek

1. Požadavky na kvalitu:

Čerstvé sperma | a) neobsahuje původce nebezpečných nákaz a nemoci, v intervalu 6 měsíců je laboratorně vyšetřováno na přítomnost patogenních mikroorganismů (včetně patogenních plísní),
| b) neobsahuje přimíseniny ani shluky spermií,
| c) má bílou barvu s odstínem šedým až krémovým (dovoleno je žlutavé zabarveni) a ostatní charakteristické vlastnosti (pach a zrnitost),
| d) hustota nemá být nižší než 700 000 spermií v 1 mm^3,
| e) aktivita spermií je nejméně 70 %,
| f) obsahuje nejméně 80 % morfologicky normálních spermií a nejvýše 10 %
| Primárních změn.
krátkodobě | a) vyhovuje ustanovením pro čerstvé sperma a po zředění a konzervování
uchovávané | b) neobsahuje patogenní mikroorganizmy, včetně patogenních plísní,
sperma | c) aktivita spermií před použitím je nejméně 50 %,
| d) v jedné inseminační dávce je nejméně 10 x 10^6 aktivních spermií; u býků
| zlepšovatelů je možno tento počet snížit za předpokladu dobrého zabřezávání
dlouhodobě | a) po zředění a konzervování vyhovuje požadavkům podle 1.2. písm. a), b) a d),
uchovávané sperma | b) aktivita spermií po rozmrazení je nejméně 30 %.

2. Požadavky na identifikaci:
2.1. Obal spermatu musí být vždy zřetelně označen značkou a číslem státního registru plemenného býka. 
2.2. Označení pejet: Pejeta se zmrazeným spermatem je značena (směrem od zavařeného konce):

kód plemene | značka státního registru | číslo státního registru | datum odběru spermatu | kód inseminační stanice (kód Evropské unie, případně kód národní) | sérologický status dárce vzhledem k IBR/ IPV

Poznámka:
Pokud je uváděn národní kód inseminační stanice, uvádí se za ním ISO kód země
Status býka k IBR/IPV se značí písmeny IP v případě, že býk je IBR pozitivní, je-li býk negativní, zůstanou dvě místa volná. 

2.3.Označení pelet:
kelímek | 1. na vnějším obvodu | a) značka a číslo státního registru býka b) datum odběru
| 2. dovnitř se vkládá štítek | a) číslo státního registru býka
| který obsahuje: | b) datum odběru
| | c) počet pelet
| | d) aktivita po rozmrazení
kovové pouzdro | na boční straně | a) značka a číslo státního registru býka
| | b) datum odběru

C.
Technické vybavení inseminační stanice býků

účet | technické vybavení
odběr spermatu | připouštědlo (v místnosti nebo venku), fantom, termostat, kompletní umělé vagíny, včetně sběračů a tepelné izolace, další pomůcky a prostředky pro odběr spermatu zejména sterilní vazelína, jednorázové rukavice, teploměr, desinfekční prostředky
hodnocení spermatu | předvážky, fotometr, mikroskop s fázovým kontrastem a výhřevným stolkem, vodní lázeň, termostat, mikroskop se zvětšením 1 : 1000 až 1500, poloautomatické pipety 25 μl, 50 μl, 100 μl, Bürkerova počítací komůrka, melanžéry na červené a bílé krvinky, tenkostěnné zkumavky, barvicí kyvety, automatický dávkovač po 10 ml, inverzní olej, diferenciální barviva, potřebné laboratorní sklo
zpracování spermatu | termostat, oscilační stolek, chladnice nebo chladící vitrína, zařízení na plnění, zatavování a značení pejet, rampy, širokohrdlém kontejnery s termočlánkem nebo automatickým zmrazovačem, teploměry, ředidla, antibiotika a pejety
uložení spermatu | zásobník s rozvody tekutého dusíku, provozní kontejnery, zásobní kontejnery s kanystry pro uložení pejet nebo pelet, transportní kontejnery, kelímky, polystyrénové nádoby na tekutý dusík, rukavice, pomůcky a ochranný štít pro manipulaci s tekutým dusíkem
dezinfekce a sterilizace | horkovzdušný sterilizátor, autokláv, desinfekční prostředky, zdroj teplé vody, destilovaná voda a nedestilovaná voda

D.
Druh a obsah evidencí vedených na inseminační stanici býků a způsob jejich předávání osobě pověřené vedením ústřední evidence

Osoba oprávněná k. provozování inseminační stanice vede písemně nebo pomocí elektronických medií:

druh evidence | obsah:
stájová evidence plemenného býka | a) číslo ušní známky, b) číslo státního registru plemenného býka c) datum narození
evidence o ustájených býcích | o příjmu býka na stanici, jeho přesunu případně úhynu
záznam o odběru býků | a) množství odebraného ejakulátu, b) kvalita odebraného ejakulátu, c) stupeň ředění, d) předpokládaná výroba inseminačních dávek
denní záznam o výrobě inseminačních dávek |
záznam o morfologickém vyšetření spermatu | zejména výskyt abnormálních spermií
záznamy o zásobách a uložení inseminačních dávek |
expediční list | Záznamy o prodeji nebo přesunu inseminačních dávek

E.
Technologické a hygienické postupy při inseminaci a skladování inseminačních dávek

1. Před inseminací plemenice provede osoba oprávněná nebo chovatel (§ 17 zákona) reprodukční anamnézu, a to zejména
1.1. po posouzení záznamů v průvodním dokladu plemenice zhodnotí dobu po jejím otelení do ohlášení říje, případně dobu od poslední inseminace,
1.2. z inseminace vyloučí plemenice s nefyziologickým výtokem z pohlavních orgánů, s příznaky nákazy nebo jiného onemocnění, plemenice mimo říji a plemenice neoznačené a přihlíží k hmotnosti jalovice a době po otelení krávy,

2. Plemenice se inseminují pokud vykazují příznaky říje, nejlépe ve druhé polovině říje. Trvají-li příznaky říje druhý den po inseminaci, může hlásit chovatel plemenici k reinseminaci. Při reinseminaci po dobu 16 dnů od poslední inseminace musí být použito sperma stejného býka.

3. Před inseminací je dodržován technologický postup přípravy inseminační dávky v
pejetě | Pejeta se rozmrazuje ve vodní lázni o teplotě asi 35 °C s vatovou zátkou dole, s doporučenou dobou rozmrazování 7 vteřin u 0,25 ml pejety a 15 vteřin u 0,5 ml pejety; po rozmrazení a osušení se pejeta zasune do inseminační aparatury tak, že je vatová zátka dole, horní konec pejety se odstřihne a po nasazení krycí pipety se provede zkouška těsnosti, přičemž se dbá, aby nedocházelo k tepelným šokům,
v peletě | Peleta se samovolně rozmrazuje v samostatné ampulí s citronanem sodným a postupně se nasává inseminační pipetou frakce bez spermií, malé množství vzduchu a frakce bohatá na spermie

4. Při inseminaci postupuje osoba oprávněná k provádění inseminace nebo chovatel tak, že dbá o hygienu a dodržuje postup vyšetření a vlastní inseminace plemenic, výsledek inseminace zjišťuje nejpozději do konce 3. kalendářního měsíce po měsíci poslední inseminace (neplatí pro masná plemena a plemenice bez tržní produkce mléka).

5. Inseminační dávky má oprávněná osoba nebo chovatel uloženy v transportním kontejneru. Jeho desinfekce se provádí jednou za 4 měsíce, v případě potřeby častěji. O provedené desinfekci se vedou záznamy.

F.
Technické vybavení pro provádění inseminace

kompletní inseminační brašna | která obsahuje účinné desinfekční prostředky, desinfekční mýdlo, teploměr, rukavice jednorázové, vata buničitá, pinzety, kovové inseminační aparatury krycí pipety, v případě používání pelet i skleněné pipety, tlačky a peany,
termobox na rozmrazování inseminačních dávek, případně termoláhve, |
zdroj teplé vody, |
transportní kontejner s vnitřním vybavením |
vybavení pro sterilizaci^*) |
chemikálie na dezinfekci kontejnerů^**) |

Poznámku:
^*) V případě sterilizace servisním způsobem je k dispozici doklad o jejím provedení. 
^**) V případě desinfekce servisním způsobem je k dispozici doklad o jejím provedení.

G.
Obsah a způsob vedení záznamů o inseminaci a jejich předávání osobě pověřené k vedení ústřední evidence

1. Pro každou plemenici je vystaven průvodní list skotu, ve kterém chovatelé a oprávněné osoby vedou záznamy o inseminaci a předávají je osobě pověřené vedením ústřední evidence.
2. Osoba oprávněná k provádění inseminace předává chovateli s vyplněným průvodním listem skotu též pejety použitých inseminačních dávek.
3. Osoba oprávněná k provádění inseminace vede inseminační výkaz písemnou formou nebo pomocí elektronických médií a předává jej do konce kalendářního měsíce následujícího po kalendářním měsíci, v němž byla inseminace provedena, jako vstupní doklad osobě pověřené vedením ústřední evidence.
4. Způsob předávání dokladů, včetně jejich oprav, stanoví osoba pověřená vedením ústřední evidence, která zpracovává, vyhodnocuje a zveřejňuje výsledky inseminace.

ČÁST II. PLEMENITBA KONÍ

A.
Postupy získávání, posuzování a zpracování spermatu,
uchovávání a výdeje inseminačních dávek

1. Odběr spermatu
1.1. Odběr spermatu se provádí pří vzeskoku hřebce na fantom nebo na klisnu pomocí umělé vagíny různého typu, přičemž se získává celý ejakulát nebo jeho frakce.

1.2. Odběr spermatu se provádí způsobem, který v nejvyšší míře zamezuje možnosti mikrobiální kontaminace odebraného spermatu.

1.3.Všechny pomůcky, které jsou v přímém kontaktu se spermatem, musí být sterilní, vnitřní vložky umělých vagín musí být sterilizovány v autoklávu nebo zhotoveny z materiálu pro jednorázové použití.

2. Hodnocení spermatu
Hodnocení spermatu se provádí u každého ejakulátu nebo jeho frakce.

Hodnotí se: | způsob hodnocení:
aktivita spermií | mikroskopicky subjektivním odhadem při zvětšení 1 : 200 až 300 a teplotě 38 až 40 °C, vyjadřuje se procentem pohyblivých spermií
hustota spermatu | fotokolorimetricky nebo počítáním v Bürkerově komůrce, vyjadřuje se počtem spermií v 1 mm^3 spermatu
množství spermatu | měřením objemu 3 odměrném válci v ml nebo vážením a přepočtem na cm^3
výskyt abnormálních spermií | nejméně každých 30 dní vyhodnocením obarveného preparátu
mikrobiologický obraz | kvalitativní a kvantitativní mikrobiologické vyšetření odebraného nativního spermatu, před zařazením do inseminace a neméně jednou za 6 měsíců

3. Zpracování spermatu
3.1. Zpracování spermatu se provádí způsobem vylučujícím jeho dodatečnou mikrobiální kontaminaci a poškození. Sperma před zpracováním splňuje kvalitativní ukazatele:

sperma pro krátkodobou konzervaci | a) obsahuje nejméně 50 % aktivních spermií, b) hustota je nejméně 100 000 spermií v 1 mm^3, c) objem je nejméně 10 cm^3, d) obsahuje 60 % morfologicky normálních spermií při posledním hodnocení, e) neobsahuje patogenní mikroorganizmy a plísně.
sperma pro dlouhodobou konzervaci | a) obsahuje nejméně 70 % aktivních spermií, b) hustota je nejméně 120 000 spermií v 1 mm^3, c) objem je nejméně 10 cm^3, d) obsahuje nejméně 70 % morfologicky normálních spermií při posledním hodnocení, e) neobsahuje patogenní mikroorganizmy a plísně.

3.2. Způsob ředění a konzervace:
krátkodobě konzervované sperma | zdravotně nezávadným ředidlem s přídavkem antibiotik technologickým postupem podle pokynů výrobce použitého ředidla.
dlouhodobě konzervované sperma | zdravotně nezávadným ředidlem s přídavkem kryoprotektiv a antibiotik technologickým postupem podle pokynů výrobce použitého ředidla; zředěné sperma rozdělené do inseminačních dávek se zmrazuje v programovatelném zmrazovači nebo v jiném zařízení zajišťujícím kontrolovaný a standardní průběh poklesu teploty zmrazovaného spermatu

Poznámka:
Způsob zpracování spermatu do pejet znemožňuje dodatečnou kontaminaci spermatu během jeho uchovávání.

4. Výdej a přeprava inseminačních dávek
4.1. Inseminační dávky krátkodobě konzervovaného spermatu se vydávají a přepravují ve speciálních přepravnících, které zajišťují udržení požadované teploty po, dobu přepravy.
4.2. Inseminační dávky dlouhodobě konzervovaného spermatu se uchovávají ponořené v tekutém dusíku v kontejnerech, které jsou před každým novým naplněním dusíkem náležitě dezinfikovány.

B.
Požadavky na kvalitu a identifikaci inseminačních dávek 

1. Požadavky na kvalitu
Inseminační dávka krátkodobě konzervovaného spermatu | a) obsahuje nejméně 50 % aktivních spermií po ředění,  b) obsahuje nejméně 300 x 10^6 aktivních spermií, c) obsahuje nejméně 10 cm^3 ředěného ejakulátu  d) neobsahuje patogenní mikroorganizmy a plísně
Inseminační dávka dlouhodobě konzervovaného spermatu | a) obsahuje po rozmrazení nejméně 30 % aktivních spermií, b) obsahuje po rozmrazení nejméně 150 x 10^6 aktivních spermií, c) neobsahuje patogenní mikroorganizmy a plísně,

2. Požadavky na identifikaci
2.1. Během hodnocení a zpracování spermatu je obal obsahující sperma označen jménem hřebce, od kterého bylo sperma odebráno.
2.2. Obal inseminační dávky krátkodobě i dlouhodobě konzervovaného spermatu je zřetelně označen: 
a) jménem a číslem státního registru hřebce,
b) označením laboratoře, která sperma zpracovala, 
c) datem odběru spermatu.

C.
Technické vybavení inseminační stanice hřebců, reprodukčního centra
a odběrového místa

1.Vybavení inseminační stanice hřebců
Částí inseminační stanice | fyzicky oddělené prostory | technické vybavení:
provoz hřebců | 1.stáj pro ustájení hřebců s možností odděleného ustájení nemocných hřebců, 2.místnost pro odběr spermatu, 3.laboratoř pro hodnocení a zpracování spermatu, 4. místnost pro mytí, desinfekci a sterilizaci pomůcek a expedici krátkodobě konzervovaného spermatu, 5. místnost pro skladování a výdej dlouhodobě konzervovaného spermatu | jeden nebo více fantomů na odběr spermatu, kompletní umělé vagíny, přístroj na vodní vysokotlaké čištění, předvážky, fotokolorimetr, Bürkerova komůrka, mikroskop vyhřívaný s fázovým kontrastem, mikroskop se zvětšením 1 : 1000 až 1500, vodní lázeň, centrifuga, chladnička, oscilační stolek, přístroj na popisování pejet, horkovzdušný sterilizátor, autokláv, zařízení na mytí skla a pomůcek teplou vodou, automatický programovatelný zmrazovač, termoboxy pro přepravu krátkodobě konzervovaného spermatu, kontejnery na uchování zmrazeného spermatu, kontejnery na uchování zásoby kapalného dusíku
provoz klisen | 1.místnost pro provedení inseminace klisen, 2.místnost pro přípravu inseminační dávky a pro mytí, desinfekci a sterilizaci 3.stáj pro ustájení klisen, jsou-li součástí inseminační stanice | klec na fixaci klisny, sonograf, přístroj na vodní vysokotlaké čištění, zařízení na mytí skla a pomůcek, zdroj teplé vody

2. Vybavení reprodukčního centra koní
Části reprodukčního centra | fyzicky oddělené prostory | přístroje a pomůcky
provoz hřebců a klisen | 1. stáj pro ustájení hřebců s možností odděleného ustájení nemocných hřebců, 2. stáj pro ustájení klisen, je-li součástí reprodukčního centra, 3. místnost pro odběr spermatu a inseminaci klisen, popřípadě venkovní připouštědlo, 4. laboratoř pro hodnocení a zpracování spermatu, 5. místnost pro mytí, desinfekci a sterilizaci pomůcek a expedici krátkodobě konzervovaného spermatu, 6. místnost pro přípravu inseminační dávky a pro mytí, desinfekci a sterilizaci pomůcek | jeden nebo více fantomů na odběr  spermatu, umělé kompletní vagíny předvážky, fotokolorimetr, Bürkerova komůrka, mikroskop vyhřívaný s fázovým kontrastem, vodní lázeň, chladnička, oscilační stolek, horkovzdušný sterilizátor, autokláv, zařízení na mytí skla a pomůcek teplou vodou, termoboxy pro přepravu krátkodobě konzervovaného spermatu,

3. Vybavení odběrového místa 
3.1. prostory pro odběr spermatu 
3.2. zdroj teplé vody.

D.
Druh a obsah evidencí vedených na inseminační stanici a v reprodukčních centrech

Druh evidence: | obsah:
1. záznam o odběru | a) číslo státního registru a jméno hřebce,
spermatu | b) datum odběru spermatu a jeho hodnocení,
| c) počet inseminačních dávek,
| d) způsob konzervace
2. záznam o výdeji | a) jméno, název odběratele,
inseminačních dávek | b) datum výdeje,
| c) číslo státního registru a jméno hřebce
| d) datum odběru spermatu,
| e) počet vydaných inseminačních dávek
3. záznam o | a) identifikační údaje plemeníka
plemeníkovi | b) potvrzení o původu
| c) všechny záznamy veterinárního dozoru
| d) připouštěcí rejstřík hřebce používaného k inseminaci, který vydává osoba pověřená vedením ústřední evidence prostřednictvím uznaného chovatelského sdružení.

Připouštěcí rejstřík hřebce obsahuje 4 průpisové připouštěcí lístky se stejným registračním číslem
Připouštěcí lístky | obsah
první a druhý připouštěcí lístek | a) jméno, identifikační číslo, plemeno, otec a matka, barva a slovní popis zapuštěné klisny,
| b) jméno, příjmení, název, adresa majitele klisny,
| c) typ zapuštění (inseminace krátkodobě konzervovaným spermatem,
| inseminace dlouhodobě konzervovaným spermatem, přirozená plemenitba, embryotransfer),
| d) jméno a číslo státního registru hřebce, kterým byla klisna zapuštěna,
| e) označeni, ve které plemenné knize je hřebec zapsán,
| f) datum zapuštění
třetí a čtvrtý připouštěcí | obsahují údaje uvedené na prvních dvou připouštěcích lístcích a dále
lístek - hlášení o | a) datum narození hříběte,
narození hříběte | b) pohlaví hříběte,
| c) údaje o narozeném hříběti (živé, mrtvé, dvojčata),
| d) grafický popis hříběte (pouze na posledním lístku),
| e) údaje o reprodukčním cyklu klisny (zmetání, vstřebání plodu, jalová po zapuštění),

Krátkodobě konzervovaná inseminační dávka je při výdeji doprovázena průvodní kartou, která obsahuje údaje, uvedené v záznamu o výdeji inseminačních dávek.

E.
Technologické a hygienické postupy při inseminaci a skladování
inseminačních dávek

1. Inseminace klisen je prováděna způsobem omezujícím v nejvyšší možné míře možnost infekce pohlavních orgánů klisny a přenos nakažlivých chorob.

2. Všechny pomůcky, které přijdou do styku se spermatem, musí být sterilní. 

3. Před inseminaci je důkladně omyta vulva klisny.

4. Inseminace se provádí vaginálním způsobem. Doba inseminace se určuje zejména podle palpačního a sonografického posouzení folikulu na vaječníku, viskozity cervikálního hlenu nebo vnějších příznaků říje. Klisny se zjevnými příznaky onemocnění pohlavních orgánů se z inseminace vyloučí.

5. K inseminaci se používají inseminační dávky spermatu splňující podmínky podle bodu B. 

F.
Technické vybavení pro provádění inseminace klisen

kompletní inseminační brašna | účinné desinfekční prostředky, desinfekční mýdlo, teploměr, rukavice jednorázové, vata buničitá, pinzety, inseminační katetry
transportní kontejner |
zdroj teplé vody |

G.
Obsah a způsob vedení záznamů o inseminaci, jejich předávání osobě pověřené
vedením ústřední evidence

1.Oprávněná osoba nebo chovatel provádějící inseminaci obdrží prostřednictvím uznaného chovatelského sdružení od osoby pověřené vedením ústřední evidence připouštěcí rejstřík (bod D).

2.Oprávněná osoba nebo chovatel provádějící inseminaci zaznamenává údaje o inseminaci a inseminované plemenici:
Způsob inseminace | způsob vedení záznamů
Při inseminaci dlouhodobě konzervovaným spermatem | do připouštěcího rejstříku a chovateli klisny vystaví příslušné 2 připouštěcí lístky
Při inseminaci krátkodobě konzervovaným spermatem | do průvodní karty inseminační dávky a chovatel klisny jí vyplněnou zasílá obratem osobě oprávněné k provozování inseminační stanice nebo reprodukčního centra koní, která zaznamená údaje do připouštěcích lístků a vystaví chovateli klisny příslušné 2 připouštěcí lístky

3.Údaje do připouštěcího rejstříku, případně do průvodní karty inseminační dávky, jsou zaznamenány na základě potvrzení o původu nebo průkazu koně. U klisny neregistrované v ústřední evidenci (§ 34 odst. 5 zákona) je uveden její majitel a všechny další známé údaje o klisně.

4.Oprávněná osoba nebo chovatel provádějící inseminaci předává zpět vyplněný připouštěcí rejstřík prostřednictvím uznaného chovatelského sdružení osobě pověřené vedením ústřední evidence do konce kalendářního roku.

5. Pro vedení záznamů o inseminaci plemene klusák platí ustanovení části H. odst.5. 

H.
II.	Rozsah záznamů o přirozené plemenitbě a způsob jejich předávání osobě pověřené 
k vedení ústřední evidence 

1. Chovatel zajišťující přirozenou plemenitbu zaznamenává po každém připuštění předepsané údaje podle části D do připouštěcího rejstříku, který obdrží prostřednictvím uznaného chovatelského sdružení od osoby pověřené vedením ústřední evidence a vystaví majiteli klisny připouštěcí lístky.

3. Údaje jsou do připouštěcího rejstříku zaznamenávány na základě potvrzení o původu nebo průkazu koně. U klisny neregistrované v ústřední evidenci (§ 34 odst. 5 zákona) se uvede nejméně její majitel a všechny další známé údaje o klisně.

4. Připouštěcí rejstřík je do konce kalendářního roku vrácen prostřednictvím uznaného chovatelského sdružení osobě pověřené vedením ústřední evidence.

5. Připouštěcí rejstřík u anglického plnokrevníka a klusáka sestává z 3 průpisových připouštěcích lístků se stejným registračním číslem, které obsahují:
a) název a adresu osoby pověřené vedením ústřední evidence b) název stanice hřebců c) číslo lístku s označením “pro plnokrevný chov” d) jméno klisny e) rok narození klisny  f) základní barvu klisny g) číslo průkazu totožnosti klisny  h) jméno a adresu majitele klisny i) jméno hřebce, kterým byla klisna připuštěna j) data připuštění (první a poslední skok v každé říji) k) potvrzení držitele hřebce o tom, že byla provedena kontrola totožnosti klisny podle průkazu totožnosti a že klisna byla připuštěna přirozenou plemenitbou l) datum vystavení lístku m) podpis držitele hřebce

6. První připouštěcí lístek zůstává v připouštěcím rejstříku a je zaslán osobě pověřené vedením ústřední evidence prostřednictvím uznaného chovatelského sdružení do 14 dnů po skončení připouštěcí sezóny.

7. Druhý lístek je určen pro držitele hřebce.

8. Třetí lístek je určen pro majitele klisny a slouží jako hlášení chovatele o výsledku připouštění a obsahuje vedle údajů uvedených v bodě a) až m):
a) údaje o výsledku připuštění, datum narození, pohlaví a barvu hříběte,  b) datum a podpis majitele klisny

9. Tento lístek zasílá chovatel prostřednictvím uznaného chovatelského sdružení osobě pověřené vedením ústřední evidence do 3 týdnů po ohřebení klisny (u klisen, které nemají živé hříbě nejpozději do 31. 8. v roce následujícím po připuštění)

Část III. PLEMENITBA PRASAT

A.
Postupy získávání, posuzování a zpracování spermatu,
uchování a výdeje inseminačních dávek kanců

1. Odběr spermatu
1.1. Odběr spermatu se provádí na inseminačních stanicích po vzeskoku kance na fantom, na odběrových místech na fantom nebo na prasnici v říji, a při ejakulaci vyvolané umělou vagínou, temperovanou na tělesnou teplotu, manuální metodou bez umělé vagíny fixací penisu.

1.2.Před odběrem spermatu se u kance očistí vyústění předkožky a jejího okolí nasucho nebo vodou s následným osušením.

1.3.Sperma se zachytává do opakovaně nebo jednorázově používaných, nespermicidních jímačů a lze jej v průběhu odběru zbavit želatinózní frakce filtrací přes dvojitou sterilizovanou gázu, převlečenou přes ústí jímače. Opakovaně používané jímače spermatu, zpravidla skleněné, a umělé vagíny jsou před dalším použitím umyty a sterilizovány.

2. Hodnocení spermatu
Hodnotí se | způsob hodnocení
barva, pach, konzistence a obsah cizích přimísenin | smyslovým posouzením
objem | odměřením v kalibrované nádobě (v ml) nebo zvážením (v g)
koncentrace spermií | fotometrem nebo počítací komůrkou na krvinky
aktivita spermií | mikroskopicky subjektivním odhadem procenta spermií s přímočarým pohybem dopředu za hlavičkou, při tělesné teplotě vzorku a při zvětšení 1 : 200 -300
výskyt abnormálních spermií | mikroskopicky na obarveném nátěru, nejméně jednou měsíčně (v procentech)
přežitelnost spermií | kontrolou aktivity spermií v průběhu doby použitelnosti ředěného konzervovaného spermatu
mikrobiologický obraz | vyšetření spermatu nejméně jednou za půl roku

3. Zpracování spermatu
Sperma pro dlouhodobou konzervaci: | a) konzervuje se zmrazováním v parách tekutého dusíku,  b) ke spermatu se přidávají antibiotika v účinné koncentraci, c) zmrazené sperma se uchovává v peletách a vydává v tubetách nebo se zmrazuje přímo v obalu, zpravidla v pejetách, ve kterých se rovněž uchovává a expeduje. d) zmrazené sperma v obalech se uchovává ve speciálních kontejnerech, dlouhodobě ponořené v tekutém dusíku, jehož hladina se kontroluje a doplňuje podle intenzity odparu, e) přežitelnost spermií se zjišťuje před výdejem k inseminaci, bezprostředně po rozmrazení
Sperma pro krátkou dobu použití: | a) používají se speciální ředidla pro kančí sperma, ředění spermatu se provádí podle návodu, předloženého k ředidlu výrobcem, b) ředidlo a použité pomůcky pro ředění mají teplotu shodnou s teplotou spermatu ± 1 °C, c) ředidlo je vždy přiléváno do spermatu, d) stupeň ředění spermatu se řídí zachováním limitního počtu biologicky aktivních spermií v jedné inseminační dávce, e) ke spermatu se přidávají antibiotika v účinné koncentraci, f) obsah biologicky aktivních spermií v čerstvém nativním spermatu se stanoví znásobením celkového počtu spermií aktivitou a odečtením morfologickyabnormálních spermií z posledního vyšetření od výsledku násobku, g) po naředění se kontroluje aktivita spermií, h) z každého odebraného spermatu naředěného pro krátkodobou konzervaci se ponechá kontrolní vzorek o objemu cca 20 ml pro sledování přežitelnosti spermií, i) naředěné sperma pro krátkodobou konzervaci se dávkuje do nespermicidních jednorázových nádob pro více inseminačních dávek, nebo sáčků, flakónů a tubet pro objem jedné inseminační dávky, j) naředěné sperma se skladuje v tekutém stavu při teplotě 16 ± 2 °C v chladničkách a termoboxech k tomuto účelu upravených nebo vyrobených, k) postupný pokles teploty spermatu až k teplotě uchování se ohybuje 3 až 4 °C za hodinu, l) přežitelnost spermií z každého ejakulátu v kontrolním vzorku ředěného spermatu hodnotí v intervalech násobku 24 hodin, podle deklarované konzervační schopnosti použitého ředidla; přičemž přežitelnost spermií nesmí klesnout pod 50 % za 24 hodin uchování

4. Uchovávání a výdej inseminačních dávek
Inseminační dávky se vydávají pro přepravu ve speciálních k tomu určených termoboxech, které zabezpečují ochranu dávek proti teplotě vnějšího prostředí po celou dobu přepravy až do převzetí dávek odběratelem, v případě zmrazeného spermatu výlučně v kontejnerech s tekutým dusíkem.

B.
Požadavky na kvalitu a identifikaci spermatu a inseminačních dávek

1. Požadavky na kvalitu:
čerstvé sperma po odběru | a) mléčná až šedobílá barva a ostatní charakteristické vlastnosti spermatu (konzistence, bez zápachu), b) objem je nejméně 100 ml; u mladých kanců do věku 12 měsíců a u plemene duroc do 18 měsíců nejméně 80 ml, c) hustota je nejméně 150 000 spermií v mm^3, d) obsahuje nejméně 70 % aktivních spermií, e) obsahuje nejméně 75 % morfologicky normálních spermií, f) neobsahuje patogenní mikroorganizmy ani masivní nález nepatogenních mikroorganizmů, g) neobsahuje cizí přimíseniny
krátkodobě konzervované sperma | a) obsahuje nejméně 1,5 x 10 aktivních spermií v jedné inseminační dávce; b) objem jedné inseminační dávky je nejméně 80 ml, c) neobsahuje patogenní mikroorganizmy,
dlouhodobě konzervované sperma | a) aktivita spermií po rozmrazení je nejméně 30 %, b) obsahuje po rozmrazení nejméně 2,5 x 10^9 aktivních spermií v jedné inseminační dávce, c) neobsahuje patogenní mikroorganizmy,

2. Požadavky na identifikaci:
2.1. Obaly spermatu při odběru a po celou dobu jeho zpracování jsou označeny registrem kance.
2.2. Vzorek pro laboratorní kontrolu přežitelnosti spermií na inseminační stanici (kontrolní vzorek) je označen registrem kance a datem odběru spermatu.
2.3. Inseminační dávky jsou označeny registrem kance a datem odběru spermatu, u velkoobjemových obalů současně počtem inseminačních dávek.

C.
Technické vybavení inseminační stanice prasat a odběrového místa

1. Vybavení inseminační stanice pro získávání spermatu a produkci inseminačních dávek k výdeji mimo hospodářství

Účel (prostory provozně odděleny) | technické vybavení:
provozně administrativní prostory | pro zaměstnance inseminační stanice, nezbytnou administrativu a pro veterinárního lékaře, obsahující též sklad pro laboratorní materiál, léčiva a jiné pomůcky pro provoz inseminační stanice a oddělené od provozní části stanice,
objekty pro ustájení kanců | individuálními volnými kotce, které mají podlahu s protiskluzovou úpravou, snadno omyvatelnou a desinfikovatelnou, jsou zajištěny před stykem plemenných kanců s jinými druhy a kategoriemi zvířat; ve stáji kanců nejsou chována jiná zvířata.
místnosti pro odběr spermatu | omyvatelnou a desinfikovatelnou pevnou podlahou s protiskluzovou úpravou a omyvatelnými stěnami, fantomem nebo více fantomy, které jsou umístěny samostatně v odběrových hrazených kotcích s únikovým prostorem pro obsluhující zaměstnance, uzavíratelnými mycími a čekacími boxy,
laboratoř | omyvatelnou a desinfikovatelnou pevnou podlahou s protiskluzovou úpravou a omyvatelnými stěnami, zdrojem teplé vody, zařízením pro temperování laboratoře na provozní teplotu, sterilizovanými, nespermicidními manipulačními pomůckami pro zpracování spermatu, ostatními pomůckami desinfikovanými, mikroskopem s vyhřívacím stolkem nebo vyhřívací destičkou, předehřívacím stolkem na sklo používané k mikroskopickému hodnocení, zařízením pro hodnocení koncentrace spermií, vodní lázní nebo topným místem s regulací teploty, zařízením ke sterilizaci, případně dalšími přístroji a zařízeními podle používané technologie zpracování spermatu a výroby inseminačních dávek, v případě používání dlouhodobě konzervovaného spermatu kryokonzervací zvláštní místností ke skladování, dobře větratelnou s omývatelnou a desinfikovatelnou podlahou, ve které jsou umístěny kontejnery se zmrazenými inseminačními dávkami a kontejnery s pohotovostní zásobou kapalného dusíku,
prostory k uchovávání inseminačních dávek | chladnička, chladnička s regulací teploty pro uchovávání spermatu
prostory pro výdej inseminačních dávek | podávací okénko nebo jiné zařízení pro předávání inseminačních dávek
prostory k mytí, desinfekci a skladování dopravních obalů | manipulační stolek s omývatelnou deskou, úložnými prostorami pro desinfekční prostředky a pro uskladnění přepravních obalů, pokud jsou používány

2. Inseminační stanice pro produkci čerstvého a krátkodobě konzervovaného spermatu používaného k inseminaci plemenic v rámci jednoho hospodářství

Účel (prostory provozně odděleny) | Technické vybavení:
prostory, umožňující práci veterinárního lékaře, hygienický a bezpečný odběr spermatu a skladování materiálu, | není specifikováno
objekty pro ustájení kanců | Individuální volné kotce, které mají podlahu s protiskluzovou úpravou, snadno omyvatelnou a desinfikovatelnou, jsou zajištěny před stykem plemenných kanců s jinými druhy a kategoriemi zvířat
pro ředění spermatu a přípravu inseminačních dávek a jejich výdej pro inseminaci plemenic | zařízením pro temperování laboratoře na provozní teplotu, sterilizovanými, nespermicidními manipulačními pomůckami pro zpracování spermatu, ostatními pomůckami desinfikovanými, zařízením ke sterilizaci pomůcek, případně dalšími přístroji a zařízeními podle používané technologie zpracování spermatu a výroby inseminačních dávek, chladnička s regulací teploty pro uchovávání spermatu

3. Podmínky, které musí být zajištěny pro odběr spermatu kance na odběrovém místě 
3.1. základní zooveterinární podmínky odběru spermatu
3.2. odběr vzorků pro vyšetření čerstvého spermatu 
3.3. předředění odebraného spermatu
3.4. přeprava a výdej spermatu na inseminační stanici k rozboru a zpracování inseminačních dávek 3.5. kopie potvrzení o původu dárce spermatu, záznam o odběru, označenými obaly na kontrolní vzorky a sperma

D.
Druh a obsah evidencí vedených na inseminační stanici

Druh evidence: | obsah evidence:
1. stájová evidence kance | a) ušní číslo kance, b) číslo státního registru kance, c) datum narození kance
2. evidenční karta kance | a) identifikační údaje kance, b) potvrzení o původu, c) všechny záznamy veterinárního dozoru, d) ostatní doklady týkající se kance
3. záznam o odběru spermatu | všechny údaje o hodnoceném spermatu včetně jeho zpracování a kontroly přežitelnosti spermií v chronologickém sledu
4. záznam o výdeji inseminačních dávek | a) jméno, název odběratele, b) datum výdeje, c) datum odběru spermatu, d) číslo státního registru a linie kanců, e) počet inseminačních dávek

E. .
Technologické a hygienické postupy při inseminaci a skladování inseminačních dávek

1. Inseminační dávky jsou dopravovány v tepelně izolovaných přepravních nádobách vyhovujících technologii konzervace spermatu.

2. Inseminace se provádí ve stájích prasnic v individuálních nebo skupinových kotcích na základě sledování nástupu říje.

3. Vyhledávání říjících se plemenic se provádí za pomoci kance působícího v přirozené plemenitbě. V chovu bez kance provádí vyhledávání říje osoba, která provádí inseminaci dotykovým testem nebo s použitím kančího feromonu.

F.
III.	Technické vybavení pro provádění inseminace prasnic

technické vybavení
místnost pro uložení inseminačních dávek a pomůcek | chladnička s termostatem, který umožňuje udržovat vnitřní teplotu 16 ± 2 °C, nekouřové vytápění, zdroj vody, pracovní stůl a skříň pro ukládání ochranných pracovních prostředků a pomůcek
pomůcky pro inseminaci | zavaděče, tepelně izolovaná brašna na přenášení inseminačních dávek a pomůcek do stáje prasnic, buničitá vata a bílá vazelína v tubě, barva pro označování zvířat

G.
Podmínky pro zabezpečení řádného a bezpečného provádění inseminace prasnic

K zajištění inseminace chovatel zabezpečí

1. osobu, která vodí kance k vyhledávání říjících se plemenic; kanec může být též fixován dvěma pevnými zábranami v manipulační chodbě u kotce,

2. při inseminaci prasnic přítomnost kance, kterého fixuje v manipulační chodbě u kotce nebo přímo v kotci pevnými zábranami, odděleně od prasnice,

3. při inseminaci ve skupinových kotcích zabezpečí chovatel oddělení inseminované prasnice od ostatních zvířat, případně pomoc osoby, která oddělí ostatní prasnice v kotci.

H.
Druh a obsah evidencí o inseminaci prasnic,
způsob jejich předávání osobě pověření vedením ústřední evidence

Chovatelé vedou:
druh evidence: | obsah evidence:
1. stájová evidence plemenice | a) ušní číslo,
| b) matriční nebo pořadové číslo,
| c) datum narození,
| d) datum posledního porodu plemenice,
2. evidenční karta plemenice | a) původové číslo zvířete
| b) matriční nebo pořadové číslo plemenice,
| c) datum narození,
| d) datum zapuštění, po kterém plemenice zabřezla,
| d) číslo státních registrů připouštěných plemeníků,
| e) datum každého porodu,
| f) počty všech a živě narozených selat

Osoba pověřená vedením ústřední evidence přejímá, zpracovává a vyhodnocuje údaje o inseminaci prasnic jen na základě žádosti chovatele, jemuž předává vyhodnocené údaje v dohodnutých termínech a za smluvních podmínek.

Část IV. PLEMENITBA OVCÍ A KOZ

A.
IV.	Postupy získávání, posuzování, a zpracování spermatu, uchovávání 
a výdeje inseminačních dávek

1. Odběr spermatu
1.1. Odběr spermatu u beranů a kozlů se provádí po očištění plemeníka a omytí a osušení předkožky, pomocí umělé vagíny, vyjmuté z termostatu o teplotě 41 až 43 °C, s frekvencí odběru v době připouštěcí sezóny u starších beranů 4 a vícekrát týdně, u mladších 2 až 3 krát týdně, u kozlů starších jednoho roku 4 a vícekrát týdně, u mladších s nižší frekvencí podle kondice.

1.2. Po odběru je sběrač s čerstvým spermatem, označený značkou a číslem státního registru plemeníka, oddělen a předán do laboratoře k hodnocení kvality.

1.3. Vzorky k mikroskopickému posouzení jsou získávány sterilními pomůckami do 10 minut po odběru. 

2. Hodnocení spermatu
Hodnocení spermatu se provádí posouzením jednotlivých vlastností spermatu podle charakteristických znaků a projevů metabolizmu při pokojové teplotě 20 až 25 °C.

Hodnocení : | hodnotí se: | způsob hodnocení:
čerstvé sperma | zdravotní nezávadnost spermatu | nejméně jednou za půl roku veterinárním vyšetřením
| objem | měřením nebo vážením s přesností na 0,1 cm^3 (0,1 g)
| barva, konzistence, pach a obsah přimísenin | smyslovým posouzením
| hustota spermatu | fotometricky u každého ejakulátu (kontrolní propočty, případně kalibrace přístrojů se provádějí v Bürkerově komůrce)
| aktivita spermatu | mikroskopicky u každého ejakulátu při zvětšení 1: 200 až 300 a při teplotě. 39 ± 1 °C, kdy se zjišťuje odhadem procentické zastoupení spermií pohybujících se vpřed za hlavičkou
| výskyt abnormálních spermií | mikroskopicky při zvětšení 1 : 1000 až 1500 a vyjadřuje se v %, u provozních beranů a kozlů nejméně jednou za měsíc
krátkodobé | aktivita spermatu*) | jako u čerstvého spermatu
uchovávané sperma | počet aktivních spermií v inseminační dávce | v 10 čtvercích v Bürkerově komůrce tak, že průměrný počet spermií ve čtverci se přepočte na velikost inseminační dávky a vynásobením počtu všech spermií procentem aktivity se zjistí počet aktivních spermií v inseminační dávce,
| přežitelnost | tepelným testem 1. u beraního spermatu tak, že 0,1 cm^3 ředěného spermatu ve zkumavce se vloží do vodní lázně o teplotě 45 ± 1 °C, za 30 minut se ke spermatu přidá 1 cm^3 citronanu sodného zahřátého na teplotu 39 ± 1 °C a aktivita se posoudí jako u čerstvého spermatu, 2. u kozlího spermatu tak, že 0,1 cm^3 ředěného spermatu se ve zkumavce s 1 cm^3 fyziologického roztoku NaCl inkubuje ve vodní lázni o teplotě 47,5 °C po dobu 10 minut a po této době se hodnotí aktivita jako u čerstvého spermatu

dlouhodobě uchovávané sperma**) | aktivita spermií***) | peleta beraního spermatu | vloží se do malé zkumavky předehřáté asi na 40 °C a ve vodní lázni se rozmrazí “na sucho”, poté se přidá 1,0 cm^3 citronanu sodného o teplotě 39 ± 1 °C a aktivita spermií se posuzuje jako u čerstvého spermatu,
| | Peleta kozlího spermatu | rozmrazí se v 1,0 cm^3 citronanu sodného o teplotě 39 ± 1 °C a aktivita spermií se posuzuje jako u čerstvého spermatu,
| | pejeta | rozmrazí se ve vodní lázni o teplotě 39 ± 1 °C, její obsah se promíchá a vypustí do zkumavky s roztokem citronanu sodného a aktivita spermií se posuzuje jako u čerstvého spermatu,
| počet aktivních spermií | jako u krátkodobě uchovávaného spermatu
| přežitelnost rozmrazeného beraního spermatu | tepelným testem tak, že se peleta rozmrazí “na sucho” ve zkumavce ve vodní lázni o teplotě 45 ± 1 °C po dobu 30 minut, poté se přidá k rozmrazené peletě 1,0 cm^3 roztoku citronanu sodného o teplotě 45 ± 1 °C a poté se aktivita hodnotí jako u čerstvého spermatu

Poznámku:
^*) u každého naředěného ejakulátu se vzorky odebírají sterilně a vyšetřují se bezprostředně po přípravě 
^**) vzorky se odebírají sterilně a vyšetřují se bezprostředně po rozmrazení
^***) u každého ejakulátu na pracovišti, kde bylo sperma zmraženo a u každého ejakulátu před expedicí 

3. Zpracování spermatu
3.1. Ke zpracování spermatu se používají ejakuláty, které odpovídají požadavkům uvedeným v bodě B. 
3.2. Veškeré předměty přicházející do styku se spermatem musí být sterilní.
3.3. Produkty živočišného původu používané při ošetření spermatu jsou zdravotně nezávadné.
3.4. Sperma se ředí při laboratorní teplotě 20 až 25 °C, k ředění se používají pouze média, která po konzervaci uchovávají dobrou oplozovací schopnost spermatu a jeho zdravotní nezávadnost a ředí se technologickým postupem podle pokynů výrobce ředidla.,
3.5. Do spermatu se přidávají antibiotika v účinné koncentraci 

4. Uchovávání a ředění spermatu

Krátkodobě | beraní sperma | při teplotě 16 až 22 °C při ředění homogenizovaným mlékem
uchovávané sperma | kozlí sperma | při teplotě 1 až 3 °C při ředění žloutkocitronanovým ředidlem
Dlouhodobě uchovávané sperma | při teplotě -196 °C v tekutém dusíku, který nebyl použit pro jiné produkty živočišného původu

5. Výdej inseminačních dávek

Inseminační dávky | vydávají se podle podmínek daných technologickým postupem;
s krátkodobým použitím | ředěné beraní sperma | vydává se v termoboxu s takovým množstvím ledu, aby teplota byla v rozmezí 16 až 22 °C,
| ředěné kozlí sperma | vydává se v termoboxu s takovým množstvím ledu, aby teplota byla v rozmezí 1 až 3 °C
Zmrazené inseminační dávky | vydávají se v kontejnerech v tekutém dusíku které jsou uvnitř uzpůsobeny použité technologii zmrazování v peletách nebo pejetách a náležitě desinfikovány před každým naplněním tekutým dusíkem, který nebyl použit pro jiné produkty živočišného původu, přičemž interval desinfekce je dán typem a používáním kontejneru

B.
Požadavky na kvalitu a identifikaci spermatu a inseminačních dávek

1. Požadavky na kvalitu:

čerstvé sperma | a) neobsahuje patogenní mikroorganizmy (včetně patogenních plísni a původce nebezpečných nákaz a nemocí, b) neobsahuje přimíseniny ani shluky spermií, c) hustota je nejméně u beraního spermatu 2,5 x 10^6 spermií v 1 mm^3 a u kozlího spermatu 2,8 x 10^6 spermií v 1 mm^3, d) aktivita spermií je nejméně u beraního spermatu 60 % a u kozlího spermatu, 70,0 % e) morfologicky normálních spermií je u beraního spermatu nejméně 80 % a u kozlího spermatu 85 %
krátkodobě uchovávané sperma | vyhovuje ustanovením pro čerstvé sperma a po ředění a konzervování: a) je aktivita spermií nejméně 60 %, b) v jedné inseminační dávce beraního spermatu je nejméně 100 x 10^6 aktivních spermií, u kozlího spermatu 50 x 10^6 aktivních spermií
dlouhodobě uchovávané sperma | vyhovuje požadavkům pro čerstvé sperma a po ředění a konzervován: a) je aktivita spermií po rozmrazení u beraního spermatu nejméně 25 % a u kozlího spermatu nejméně 30 % b) je v jedné inseminační dávce beraního spermatu nejméně 100 x 10^6 aktivních spermií, u kozlího spermatu 50 x 10^6 aktivních spermií

2. Požadavky na identifikaci:
Obal spermatu při odběru, zpracování; uchovávání a transportu je vždy zřetelně označen státním registrem plemeníka.

C.
Technické vybavení inseminační stanice a odběrového místa ovcí a koz

Část inseminační stanice | technické vybavení:
Prostory pro ustájení | plemenní berani jsou ustájeni v kotcích s plochou 3,5 m^2 na kus se stálým přívodem pitné vody do automatických napáječek a krmnými žlaby, kotce mají pevné, snadno čistitelné a desinfikovatelné podlahy
| plemenní kozli jsou ustájeni v individuálních kotcích s plochou nejméně 3,5 m^2 a s neprůhlednými bočními stěnami; kotce mají pevné, snadno čistitelné a desinfikovatelné podlahy
Prostory pro odběr spermatu | připouštědlo {v místnosti nebo venku), kompletní umělé vagíny, včetně sběračů a tepelné izolace, pomůcky a prostředky pro odběr spermatu (sterilní vazelína, jednorázové rukavice, teploměr, dezinfekční prostředky)
Laboratoř pro hodnocení a zpracování spermatu | mikroskop se zvětšením 1 : 1000 až 1500, mikroskopem s fázovým kontrastem, fotometr, termostat, Bürkerova počítací komůrka, termostat, chladnice nebo chladící vitrína, zařízení na plnění, zatavování a značení pejet, rampay, širokohrdlé kontejnery s termočlánkem nebo automatickým zmrazovačem, teploměry, ředidla, antibiotika, pejety
Prostory pro dezinfekci a sterilizaci | horkovzdušný sterilizátor a desinfekční chemikálie, zdroj teplé vody*)
Prostory pro uložení inseminačních dávek | provozní kontejnery, zásobní kontejnery pro uložení pejet nebo pelet, transportní kontejnery, polystyrénové nádoby na tekutý dusík, rukavice, pomůcky a ochranný štít pro manipulaci s tekutým dusíkem

Vybavení odběrového místa

Odběrové místo splňuje podmínky ustájení a požadavky na technické vybavení, kterými lze zajistit hygienický odběr spermatu, jeho zpracování a uložení.

D.
Druh a obsah evidencí vedených na inseminační stanici

druh evidence: | obsah evidence:
1. stájová evidence plemeníka | a) ušní číslo,
| b) číslo státního registru plemeníka,
| c) plemeno a datum narození plemeníka
2. evidenční karta plemeníka | a) identifikační údaje plemeníka,
| b)záznamy veterinárního dozoru,
| c) ostatní doklady týkající se plemeníka
3. záznam o odběru spermatu | všechny údaje o hodnoceném spermatu včetně jeho zpracování a kontroly přežitelnosti spermií v chronologickém sledu
4. záznam o výdeji | a) jméno, název odběratele,
inseminačních dávek | b) datum výdeje,
| c) datum odběru spermatu,
| d) číslo státního registru a linie plemeníků,
| e) počet inseminačních dávek

E.
Technologické a hygienické postupy při inseminaci
a skladování inseminačních dávek

1. Před inseminací plemenice provede osoba oprávněná nebo chovatel provádějící inseminaci reprodukční anamnézu: po posouzení záznamů v dokladu plemenice zhodnotí dobu po jejím obahnění nebo okozlení do ohlášení říje, případně dobu od poslední inseminace a z inseminace vyloučí plemenice s nefyziologickým výtokem z pohlavních orgánů, s příznaky nákazy nebo jiného onemocnění, plemenice mimo říji a plemenice neoznačené.

2. Říjící se ovce nebo kozy jsou vybírány zpravidla s pomocí plemeníka, který působí v přirozené plemenitbě. Inseminace ovcí se provádí od poloviny do začátku třetí třetiny říje, mezi 12 až 18 hodinou říje, u koz zpravidla 10 až 12 hodin od nástupu říje.

3. K inseminaci se používá jen sperma splňující stanovené podmínky, při dodržení technologického postupu přípravy inseminační dávky.

4. Při inseminaci postupuje oprávněná osoba nebo chovatel tak, že: 
4.1. dbá o hygienu inseminace,
4.2. inseminaci provádí v připouštědlech,
4.3. dodržuje správný postup inseminace ovcí a koz čerstvým nebo zmraženým spermatem. 

F.
Technické vybavení pro provádění inseminace ovcí a koz
(podle druhu inseminačních dávek)

1. spekulum s vnitřním osvětlením,
2. skleněné nebo jednorázové plastové pipety,
3. výtlačné gumové balonky nebo jednorázové injekční stříkačky, 
4. transportní kontejner s vnitřním vybavením,
5. parafínový olej, líh, vata a nůžky.

G.
Druh a obsah záznamů o inseminaci,
způsob jejich předávání osobě pověřené vedením ústřední evidence

1. Chovatelé vedou stájový zápisník plemenic zařazených do inseminace, do kterého zaznamenávají ušní čísla a data narození plemenic a osoby oprávněné a chovatelé provádějící inseminaci do něj zaznamenávají údaje o každé inseminaci.

2. Osoba pověřená vedením ústřední evidence přejímá, zpracovává a vyhodnocuje údaje o inseminaci bahnic jen na základě žádosti chovatele, jemuž předává vyhodnocené údaje v dohodnutých termínech a za smluvních podmínek.