Title: Příloha č
Author: hana-sulcova
Company: Nakladatelství C.H. Beck

Příloha č. 10
Postupy pro laboratorní zkoušení krmiv,
doplňkových látek a premixů

 Seznam postupů chemického zkoušení doplňkových látek, premixů a krmných směsí s použitím premixů

 Název postupu Označení
	 postupu
-----------------------------------------------------------------
1.   Stimulátory růstu
1.1. Stanovení obsahu avilamycinu        A
1.2. Stanovení obsahu avoparcinu         A           B
1.3. Stanovení obsahu flavofosfolipu     A
1.4. Stanovení obsahu olachindoxu        A           B
1.5. Stanovení obsahu monensinu          A
1.6. Stanovení obsahu monensinu                      B
1.7. Stanovení obsahu salinomycinu       A
1.8. Stanovení obsahu salinomycinu                   B
1.9. Stanovení obsahu tylosinu           A
1.10.Stanovení obsahu virginiamycinu     A           B
1.11.Stanovení obsahu zinkbacitracinu    A
1.12.Stanovení obsahu zinkbacitracinu                B
2.   Antikokcidika
2.1. Stanovení obsahu amprolia           A
2.2. Stanovení obsahu amprolia                       B
2.3. Stanovení obsahu diclazurilu        A
2.4. Stanovení obsahu lasalocidu         A
2.5. Stanovení obsahu maduramicinu       A
2.6. Stanovení obsahu metylbenzochátu    A
2.7. Stanovení obsahu narasinu           A
2.8. Stanovení obsahu narasinu                       B
2.9. Stanovení obsahu nikarbazinu        A
2.10.Stanovení obsahu nikarbazinu                    B
2.11.Stanovení obsahu robenidinu         A           B
2.12.Stanovení obsahu sulfaqinoxalinu                B
2.13.Stanovení obsahu meticlorpindolu    A
2.14.Stanovení obsahu meticlorpindolu                B
2.15.Stanovení obsahu kurasanu           A
2.16.Stanovení obsahu salinomycinu
- je uvedeno v části 1.7 a 1.8 této přílohy
2.17.Stanovení obsahu monensinu
- je uvedeno v části 1.5 a 1.6 této přílohy
2.18.Stanovení obsahu dinitolmidu                    B
2.19.Stanovení obsahu furazolidonu                   B
2.20.Stanovení obsahu decoquinátu                    B
2.21.Stanovení obsahu arprinocidu                    B
2.22.Stanovení obsahu ethopabátu                     B
3.   Chemoterapeutika
3.1. Stanovení obsahu dimetridazolu      A
3.2. Stanovení obsahu dimetridazolu                  B
3.3. Stanovení obsahu nifursolu                      B
4.   Vitaminy
4.1. Stanovení obsahu vitaminu A         A
4.2. Stanovení obsahu vitaminu A         A
4.3. Stanovení obsahu vitaminu A                     B
4.4. Stanovení obsahu vitaminu E         A
4.5. Stanovení obsahu přidaného
     vitaminu E                          A
4.6. Stanovení obsahu vitaminu E                     B
4.7. Stanovení obsahu cholinu                        B
4.8. Stanovení obsahu pantothenanu
     vápenatého                          A
4.9. Stanovení obsahu vitaminů B1,
     B2, B6                              A
4.10.Stanovení obsahu vitaminu B2        A
4.11.Stanovení obsahu vitaminu B1                    B
4.12.Stanovení obsahu vitaminu B6        A
4.13.Stanovení obsahu vitaminu C         A
4.14.Stanovení obsahu vitaminu C                     B
4.15.Stanovení obsahu vitaminu K3        A
4.16.Stanovení obsahu vitaminu K3                    B
5.   Mikroelementy
5.1. Stanovení obsahu manganu, zinku,
     železa a mědi je uvedeno v příloze
     č.9, část 8 této vyhlášky
5.2. Stanovení obsahu kobaltu                        B
5.3. Stanovení obsahu selenu                         B
5.4. Stanovení obsahu jodu                           B
6.   Vehikula a pojiva
6.1. Stanovení obsahu oxidu křemičitého
     je uvedeno v příloze č.9, část 7
     této vyhlášky
6.2. Stanovení obsahu oxidu hlinitého je
     uvedeno v příloze č.9, část 7 této vyhlášky
7.   Výpočty
7.1. Vyhodnocování a výpočet výsledků
     stanovení obsahu doplňkových látek
     difuzní plotnovou metodou           A
8.   Antioxidanty
8.1. Stanovení obsahu etoxyquinu                     B
8.2. Stanovení obsahu butylhydroxytoluenu,
     butylhydroxyanisolu a galátů                    B
9.   Barviva
9.1. Stanovení obsahu kapsantinu v paprice           B
9.2. Stanovení obsahu nativních a přidaných
     karotenoidů                                     B
10.  Konzervanty
10.1.Stanovení obsahu kyseliny mravenčí              B
10.2.Stanovení obsahu oxidu siřičitého               B
10.3.Stanovení obsahu formaldehydu       A
11.  Zchutňovadla
11.1.Stanovení obsahu sacharinu                      B
12.  Mikrobiotika
12.1.Stanovení počtu zárodků bakterií kmene
     Streptococcus                                   B
12.2.Stanovení počtu zárodků bakterií kmene
     Bacillus                                        B

1. Stimulátory růstu

 1.1. Stanovení obsahu avilamycinu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu avilamycinu v premixech a krmných směsích.
 Obsah avilamycinu se stanoví difuzním plotnovým postupem na základě inhibičního účinku na růst testovacího mikroorganismu Micrococcus luteus ATCC 10 240.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 1.2. Stanovení obsahu avoparcinu

 Účel, rozsah a princip

 Používají se tři zkušební pokusy, z nichž dva pro stanovení avoparcinu v premixech bez i za přítomnosti ionoforových kokcidiostatik, třetí pro stanovení obsahu avoparcinu v krmivech. Po rozpuštění stanovené navážky vzorku premixu nebo krmiva ve směsi aceton-voda-kyselina chlorovodíková se obsah avoparcinu stanoví na základě inhibičního účinku na růst testovacího mikroorganismu Bacillus subtilis ATCC 6633 mikrobiologickou difuzní plotnovou metodou.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 1.3. Stanovení obsahu flavofosfolipolu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu flavofosfolipolu v premixech.
 Obsah flavofosfolipolu se stanoví na základě inhibičního účinku na růst testovacího mikroorganismu Staphylococcus aureus ATCC 6538 difuzní plotnovou metodou.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 1.4. Stanovení obsahu olachindoxu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu olachindoxu v premixech a krmných směsích.
 Obsah olachindoxu se stanoví po extrakci směsí aceton-voda a vyčeření Carresovými činidly metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 1.5. Stanovení obsahu monensinu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu monensinu v premixech a krmných směsích.
 Obsah monensinu se stanoví na základě jeho inhibičního účinku na růst testovacího mikroorganismu Bacillus subtilis ATCC 6633 difuzní plotnovou metodou.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 1.6. Stanovení obsahu monensinu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu monensinu v premixech a krmných směsích.
 Obsah monensinu se stanoví po extrakci vzorku směsným rozpouštědlem hexan-octan ethylnatý metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie na reversní fázi s postkolonovou derivatizací.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 1.7. Stanovení obsahu salinomycinu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu salinomycinu v premixech a krmných směsích.
 Obsah salinomycinu se stanoví na základě inhibičního účinku na růst testovacího mikroorganismu Bacillus subtilis ATCC 6633 difuzní plotnovou metodou.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 1.8. Stanovení obsahu salinomycinu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu salinomycinu v premixech a krmných směsích.
 Obsah salinomycinu se stanoví po extrakci vzorku směsným rozpouštědlem hexan-octan ethylnatý metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie na reversní fázi s postkolonovou derivatizací.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 1.9. Stanovení obsahu tylosinu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu tylosinu v premixech a krmných směsích.
 Obsah tylosinu se stanoví po extrakci vzorku ethylalkoholem na základě inhibičního účinku na růst testovaného mikroorganismu Micrococcus varians ATCC 9341 difuzní plotnovou metodou.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 1.10. Stanovení obsahu virginiamycinu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu virginiamycinu v premixech a krmných směsích.
 Obsah virginiamycinu se stanoví po extrakci vzorku směsí kyseliny citronové a acetonu na základě inhibičního účinku na růst testovacího mikroorganismu Micrococcus varians ATCC 9341 difuzní plotnovou metodou.

 Opakovatelnost

 Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu virginamycinu:
 do 10 mg/kg 2 mg/kg
 od 10 do 25 mg/kg 20 % relat.
 od 25 do 50 mg/kg 5 mg/kg
 nad 50 mg/kg 10 % relat.

 1.11. Stanovení obsahu zinkbacitracinu difuzí na agaru

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení zinkbacitracinu v premixech.
 Obsah zinkbacitracinu se stanoví na základě inhibičního účinku na růst testovacího mikroorganismu Micrococcus luteus ATCC 10 240 difuzní plotnovou metodou.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 1.12. Stanovení obsahu zinkbacitracinu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení zinkbacitracinu v krmivech a premixech. Mez stanovitelnosti je obsah zinkbacitracinu 5 mg/kg.
 Obsah zinkbacitracinu se stanoví na základě inhibičního účinku na růst testovacího mikroorganismu Micrococcus luteus ATCC 10 240 difuzní plotnovou metodou.

 Opakovatelnost

 Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu zinkbacitracinu:
 do 10 mg/kg 2 mg/kg
 od 10 mg/kg do 25 mg/kg 20 % relat.
 od 25 mg/kg do 50 mg/kg 5 mg/kg
 nad 50 mg/kg 10 % relat.

2. Antikokcidika

 2.1. Stanovení obsahu amprolia

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu amprolia v premixech a v krmných směsích.
 Obsah amprolia se stanoví po extrakci ethylalkoholem metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie nebo metodou izotachoforetickou nebo po reakci s acetylaminonitrothiazolem spektrofotometricky.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 2.2. Stanovení obsahu amprolia

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu amprolia v premixech a krmných směsích. Mez stanovitelnosti je 40 mg/kg amprolia.
 Obsah amprolia se stanoví po extrakci methylalkoholem spektrofotometrickou metodou.

 Opakovatelnost

 Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu amprolia:
do 100 mg/kg 10 mg/kg
od 100 do 5 000 mg/kg 10 % relat.
od 5 000 do 10 000 mg/kg 500 mg/kg
 nad 10 000 mg/kg 5 % relat.

 2.3. Stanovení obsahu diclazurilu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu diclazurilu v premixech pro obsahy 20 mg/kg až 4 000 mg/kg.
 Obsah diclazurilu se stanoví po extrakci methylalkoholem metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie s iontovými páry na reverzní fázi s použitím UV detekce.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 2.4. Stanovení obsahu lasalocidu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu lasalocidu v premixech a krmných směsích.
 Obsah lasalocidu se stanoví na základě inhibičního účinku na růst testovacího mikroorganismu Bacillus subtilis ATCC 6633 difuzní plotnovou metodou.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 2.5. Stanovení obsahu maduramicinu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu maduramicinu v premixech a krmných směsích.
 Obsah maduramicinu se stanoví po extrakci vzorku směsí acetonitrilu s dichlormethanem, derivatizaci dansylhydrazinem metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie na reverzní fázi s použitím fluorimetrické nebo UV detekce.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 2.6. Stanovení obsahu methylbenzochátu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu methylbenzochátu v krmných směsích. Mez stanovitelnosti je 1 mg/kg.
 Obsah methylbenzochátu se stanoví po extrakci vzorku směsným rozpouštědlem methanol-kyselina methansulfonová metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie na reverzní fázi.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 2.7. Stanovení obsahu narasinu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu narasinu v premixech a krmných směsích.
 Obsah narasinu se stanoví na základě inhibičního účinku na růst testovacího mikroorganismu Bacillus subtilis ATCC 6633 difuzní plotnovou metodou.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 2.8. Stanovení obsahu narasinu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu narasinu v premixech a krmných směsích.
 Obsah narasinu se stanoví po extrakci vzorku směsným rozpouštědlem hexan-octan ethylnatý metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie na reverzní fázi s postkolonovou derivatizací.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 2.9. Stanovení obsahu nikarbazinu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu nikarbazinu v premixech a krmných směsích.
 Obsah nikarbazinu se stanoví spektrofotometricky po extrakci n-hexanem a chromatografické separaci v prostředí alkalického roztoku chloridu draselného.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 2.10. Stanovení obsahu nikarbazinu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu nikarbazinu v premixech a krmných směsích. Mez stanovitelnosti je 20 mg/kg.
 Obsah nikarbazinu se stanoví po extrakci dimethylformamidem spektrofotometricky při 430 nm.

 Opakovatelnost

 Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu nikarbazinu:
 pod 100 mg/kg 10 mg/kg
  od 100 do 5 000 mg/kg 10 % relat.
  od 5 000 do 10 000 mg/kg 500 mg/kg
 nad 10 000 mg/kg 5 % relat.

 2.11. Stanovení obsahu robenidinu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu robenidinu v premixech a krmných směsích.
 Obsah robenidinu se stanoví po extrakci vzorku okyseleným methylalkoholem metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) na reverzní fázi s použitím UV detekce.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 2.12. Stanovení sulfaquinoxalinu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu sulfaquinoxalinu v premixech a krmných směsích. Mez stanovitelnosti je 20 mg/kg.
 Obsah sulfaquinoxalinu se stanoví po extrakci vzorku dimethylformamidem s chloroformem a po jeho alkalické hydrolýze diazotací a kopulací N-2-aminoethyl-1-naftylaminem, spektrofotometricky při vlnové délce 545 nm.

 Opakovatelnost

 Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu sulfaquinoxalinu:
	 20 až 100 mg/kg 10 mg/kg
	 100 až 5 000 mg/kg 10 % relat.
	 5 000 až 10 000 mg/kg 500 mg/kg
	 nad 10 000 mg/kg 5 % relat.

 2.13. Stanovení obsahu meticlorpindolu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu meticlorpindolu v premixech a krmných směsích.
 Obsah meticlorpindolu se stanoví po extrakci vzorku směsí methylalkoholu a hydroxidu amonného metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie.

 Opakovatelnost

 Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu meticlorpindolu:
 pod 100 mg/kg 5 mg/kg
 nad 100 mg/kg 5 % relat.

 2.14. Stanovení obsahu meticlorpindolu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu meticlorpindolu v premixech a krmných směsích.
 Meticlorpindol se stanoví po extrakci vzorku směsným rozpouštědlem methanol-chloroform-amoniak po následném přečištění chromatografií na pevné fázi spektrofotometricky.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 2.15. Stanovení obsahu kurasanu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení kurasanu v premixech.
 Obsah kurasanu se stanoví po extrakci hexanem spektrofotometricky v UV oblasti při vlnové délce 361 nm.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 2.16. Stanovení obsahu salinomycinu

 Postup stanovení obsahu salinomycinu je uveden v části 1 této přílohy.

 2.17. Stanovení obsahu monenzinu

 Postup stanovení obsahu monenzinu je uveden v části 1 této přílohy.

 2.18. Stanovení dinitolmidu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu dinitolmidu v premixech a krmných směsích. Mez stanovitelnosti je 40 mg/kg.
 Obsah dinitolmidu se stanoví po extrakci vzorku acetonitrilem spektrofotometricky.

 Opakovatelnost

 Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu dinitolmidu:
 pod 100 mg/kg 10 mg/kg
  od 100 do 5 000 mg/kg 10 % relat.
  od 5 000 do 10 000 mg/kg 500 mg/kg
	 nad 10 000 mg/kg 5 % relat.

 2.19. Stanovení obsahu furazolidonu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu furazolidonu v krmivech a premixech. Mez stanovitelnosti je 10 mg/kg.
 Vzorek je extrahován acetonem a po reakci s močovinou je obsah furazolidonu stanoven spektrofotometricky při vlnové délce 375 nm.

 Opakovatelnost

 Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu furazolidonu:
  od 10 do 20 mg/kg 50 % relat.
  od 20 do 100 mg/kg 10 mg/kg
  od 100 do 5 000 mg/kg 10 % relat.
  od 5 000 do 10 000 mg/kg 500 mg/kg
 nad 10 000 mg/kg 5 % relat.

 2.20. Stanovení obsahu decoquinátu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu decoquinátu v premixech a krmných směsích.
 Vzorek se extrahuje methanolickým roztokem chloridu vápenatého a obsah decoquinátu se stanoví fluorometricky.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 2.21. Stanovení obsahu arprinocidu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu arprinocidu v premixech a krmných směsích.
 Vzorek se extrahuje chloroformem a obsah arprinocidu se stanoví metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie s UV detekcí při 254 nm.

 Opakovatelnost

 Nezjištěna

 2.22. Stanovení obsahu ethopabátu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu ethopabátu v krmivech.
 Obsah, který se stanoví po extrakci vzorku směsí methylalkohol - voda s přečištění chromatografií na pevné fázi metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie s použitím UV detekce při 280 nm.

 Opakovatelnost

 Nezjištěna

3. Chemoterapeutika

 3.1. Stanovení obsahu dimetridazolu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu dimetridazolu v krmivech a krmných směsích.
 Obsah dimetridazolu se stanoví polarograficky po extrakci kyselinou chlorovodíkovou v prostředí octanu sodného.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 3.2. Stanovení obsahu dimetridazolu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu dimetridazolu v krmných směsích.
 Obsah dimetridazolu se stanoví po extrakci vzorku methylalkoholem a přečištění chromatografií na pevné fázi spektrofotometricky.

 Opakovatelnost

 Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu dimetridazolu:
do      4 mg/kg                   50 % relat.
 od 4 do 10 mg/kg              2 mg/kg
 od 10 do 25 mg/kg           20 % relat.
 od 25 do 50 mg/kg           5 mg/kg
 od 50 do 5 000 mg/kg       10 % relat.
 od 5 000 do 10 000 mg/kg 500 mg/kg
 od 10 000 mg/kg 5 % relat.

 3.3. Stanovení obsahu nifursolu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu nifursolu v premixech a krmných směsích.
 Nifursol se extrahuje z krmiva dimethylformamidem. Obsah nifursolu se po reakci s fenylhydrazinem stanoví spektrofotometricky při 555 nm.

 Opakovatelnost

 Nezjištěna

4. Vitaminy

 4.1. Stanovení obsahu vitaminu A

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu A v premixech a krmných směsích.
 Obsah vitaminu A se stanoví po alkalické hydrolýze a následné extrakci na pevné fázi a po převedení do organického rozpouštědla metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie s UV detekcí při 254 nm.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 4.2. Stanovení obsahu vitaminu A

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu A v premixech a v krmných směsích.
 Obsah vitaminu A se stanoví v premixech po alkalické hydrolýze a následné extrakci do organického rozpouštědla spektrofotometricky. Po odstranění interferujících látek chromatografií na pevné fázi je postup použitelný i pro krmné směsi.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 4.3. Stanovení obsahu vitaminu A

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu A v premixech a krmných směsích.
 Obsah vitaminu A se stanoví po alkalické hydrolýze a následné extrakci organickým rozpouštědlem metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie na reverzní fázi.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 4.4. Stanovení obsahu vitaminu E

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu E v premixech a krmných směsích.
 Obsah vitaminu E se stanoví po alkalické hydrolýze a následné extrakci na pevné fázi a převedení do organického rozpouštědla metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie na normální fázi.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 4.5. Stanovení obsahu přidaného vitaminu E

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu přidaného vitaminu E v premixech a krmných směsích.
 Obsah přidaného vitaminu E se stanoví metodou plynové chromatografie po extrakci vzorku diethyletherem nebo hexanem přímo, popř. po přečištění na sloupci oxidu hlinitého.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 4.6. Stanovení obsahu vitaminu E

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení vitaminu E v premixech a krmných směsích.
 Obsah vitaminu E se stanoví po alkalické hydrolýze a následné extrakci organickým rozpouštědlem metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie na reverzní fázi.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 4.7. Stanovení obsahu cholinu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu cholinu v premixech a krmných směsích.
 Obsah cholinu se stanoví po alkalické hydrolýze vzorku hydroxidem barnatým a po přečištění na ionexu spektrofotometricky.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 4.8. Stanovení obsahu pantothenanu vápenatého

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu pantothenanu vápenatého v premixech.
 Obsah pantothenanu vápenatého se stanoví na základě inhibičního účinku na růst testovacího mikroorganismu Saccharomyces carlsbergensis 4288 (ATCC 9080) difuzní plotnovou metodou.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 4.9. Stanovení vitaminů B1, B2 a B6

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminů B1, B2 a B6 v premixech a krmných směsích.
 Vitaminy B1 (thiamin), B2 (riboflavin) a B6 (pyridoxin) se extrahují ze vzorku krmiva vodou a po hydrolýze kyselinou chloristou se obsah stanoví metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie s využitím iontových párů na reverzní fázi. Detekce vitaminu B2 a B6 se provádí přímo fluorimetricky, zatímco vitamin B1 se před detekcí nejprve oxiduje derivatizačním činidlem v reakční smyčce postkolonové derivatizace.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 4.10. Stanovení obsahu vitaminu B2

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu B2 v premixech.
 Obsah vitaminu B2 se stanoví fluorimetricky v mírně okyseleném prostředí na základě fluorescence při vlnové délce 440 nm nebo difuzní plotnovou metodou na základě inhibičního účinku na růst testovacího mikroorganismu Lactobacillus rhamnosus ATCC 7469 (CCM 1825).

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 4.11. Stanovení obsahu vitaminu B1

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu B1 v premixech a krmných směsích. Mez stanovitelnosti je 5 mg/kg.
 Vzorek se převede do roztoku horkou zředěnou kyselinou sírovou s následující enzymatickou hydrolýzou. Po alkalické oxidaci se vzniklý thiochrom extrahuje isobutylalkoholem a obsah vitaminu B1 se stanoví fluorimetricky.

 Opakovatelnost

 Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu vitaminu B1:
 do 500 mg/kg 10 % relat.
 nad 500 mg/kg 5 % relat.

 4.12. Stanovení obsahu vitaminu B6

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu B6 v premixech.
 Vitamin B6 ve všech jeho formách se stanoví na základě stimulačního účinku na testovací mikroorganismus kvasinky Saccharomyces carlsbergensis 4228 (ATCC 9080) difuzní plotnovou metodou.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 4.13. Stanovení obsahu vitaminu C

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu C v premixech.
 Obsah vitaminu C se stanoví v prostředí kyseliny metafosforečné a ethylalkoholu polarograficky metodou vnitřního standardu.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 4.14. Stanovení obsahu vitaminu C

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu C v premixech a krmných směsích. Mez stanovitelnosti je 5 mg/kg.
 Obsah vitaminu C se stanoví po extrakci a přečištění na chromatografické koloně spektrofotometricky.
 Pro krmiva s obsahem nižším než 10 000 mg/kg vitaminu C se hydrazonová forma po eluci z chromatografické kolony izoluje pomocí chromatografie na tenké vrstvě.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 4.15 Stanovení obsahu vitaminu K3

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu K3 v premixech.
 Obsah vitaminu K3 se stanoví po extrakci směsí ethylalkohol - kyselina metafosforečná polarografickou metodou.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 4.16. Stanovení obsahu vitaminu K3

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu K3 v premixech a krmných směsích. Mez stanovitelnosti je 1 mg/kg.
 Po extrakci vzorku ethylalkoholem se stanoví obsah vitaminu K3 spektrofotometricky při vlnové délce 635 nm.

 Opakovatelnost

 Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu vitaminu K3:
 do 10 mg/kg 20 % relat.
 od 10 do 14 mg/kg 2 mg/kg
 od 14 do 100 mg/kg 15 % relat.
 od 100 do 150 mg/kg 15 mg/kg
 nad 150 mg/kg 10 % relat.

5. Mikroelementy

 5.1. Stanovení obsahu manganu, zinku, železa a mědi

 Postup stanovení obsahu mědi, železa, manganu a zinku je uvedena v příloze č.9, část 8 této vyhlášky.

 5.2. Stanovení kobaltu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu kobaltu v premixech a v krmných směsích. Stanovení je založeno na principu tvorby barevného komplexu kobaltu s 2-nitroso-1-naftolem jehož absorbance se měří spektrofotometricky.

 Opakovatelnost

 Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu kobaltu:
 do 5 mg/kg 50 % relat.
 od 5 do 10 mg/kg 2,5 mg/kg
 od 10 do 30 mg/kg 25 % relat.
 od 30 do 50 mg/kg 7,5 mg/kg
 nad 50 mg/kg 15 % relat.

 5.3. Stanovení obsahu selenu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení selenu v premixu a krmných směsích.
 Ve vzorku se po rozkladu kyselinou dusičnou v uzavřeném systému stanoví obsah selenu metodou atomové absorpční spektrometrie s hydridovou technikou.

 Opakovatelnost

 Nezjištěna

 5.4. Stanovení obsahu jodu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu jodu v premixech. Vzorek se mineralizuje po přídavku ethanolického roztoku hydroxidu draselného při 520 stupních Celsia.
 Jodidy se zoxidují manganistanem draselným na jodičnany. Po přidání jodidu draselného se uvolní jod, který se stanoví titrací thiosíranem sodným.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

6. Vehikula a pojiva

 6.1. Stanovení oxidu křemičitého

 Postup stanovení obsahu oxidu křemičitého je uveden v příloze č.9, část 7 této vyhlášky.

 6.2. Stanovení oxidu hlinitého

 Postup stanovení obsahu oxidu hlinitého je uveden v příloze č. 9, část 7 této vyhlášky.

7. Výpočty

 7.1. Vyhodnocování a výpočet výsledků stanovení doplňkových látek difuzní plotnovou metodou

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje uzančně závazný způsob pro vyhodnocování a výpočet výsledků při stanovení obsahu doplňkových látek v premixech a krmných směsích difuzní plotnovou metodou.
 Průměry inhibičních nebo stimulačních zón, vzniklých při stanovení doplňkových látek difuzní plotnovou metodou, se měří pomocí odpichovátka s přesností nejméně na 0,1 mm. Ze souboru takto získaných hodnot se vypočítá aritmetický průměr pro každou koncentraci zkoušeného vzorku i standardu.

8. Antioxidanty

 8.1. Stanovení obsahu ethoxyquinu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu ethoxyquinu v krmivech a v premixech.
 Ethoxyquin je ze vzorku extrahován methylalkoholem a alikvotní podíl extraktu se po zředění vodou reextrahuje do petroletheru a obsah ethoxyquinu se stanoví fluorimetricky.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 8.2. Stanovení obsahu butylhydroxytoluenu, butylhydroxyanisolu a galátů

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu butylhydroxytoluenu, butylhydroxyanisolu a galátů v tucích.
 Vzorek se rozpustí v hexanu a butylhydroxytoluenu, butylhydroxyanisol a galáty se extrahují acetonitrilem. Vlastní stanovení se provádí metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie s použitím UV detekce při 280 nm.

 Opakovatelnost

 Nezjištěna

9. Barviva

 9.1. Stanovení kapsantinu v paprice

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení celkového obsahu barviva vyjádřeného jako kapsantin, který je převažujícím barvivem papriky.
 Obsah kapsantinu se stanoví po extrakci vzorku benzenem metodou podle Benedikta spektrofotometricky.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

 9.2. Stanovení obsahu nativních a přidaných karotenoidů

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahů esterů kyseliny apo-karotinové, citranaxantinu a kantaxantinu, popř. karoténů, veškerých xantofylů, luteinu a zeaxantinu.
 Vzorek se extrahuje rozpouštědlem, přečistí se chromatografií na pevné fázi a obsah příslušného barviva se stanoví spektrofotometricky.

 Opakovatelnost

 Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními obsahu karotenoidů prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit 15 % relativních.

10. Konzervy

10.1. Stanovení obsahu kyseliny mravenčí

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu kyseliny mravenčí v silážích.
 Kyselina mravenčí se stanovuje metodou podle Fuchse. Těkavé kyseliny, vydestilované ze vzorku, se podrobí reakci s manganistanem draselným. Kyselina mravenčí je jako jediná oxidována v neutrálním nebo slabě alkalickém prostředí.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

10.2. Stanovení obsahu oxidu siřičitého

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu oxidu siřičitého v krmivech.
 Oxid siřičitý se uvolní po okyselení vzorku krmiva a jímá se do roztoku elektrolytu. Obsah oxidu siřičitého se stanoví metodou diferenční pulzní polarografie.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

10.3. Stanovení obsahu formaldehydu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu formaldehydu v krmivech.
 Ze vzorku se po okyselení kyselinou fosforečnou izoluje formaldehyd destilací s vodní parou a formaldehyd se v destilátu stanoví po reakci s kyselinou chromotropovou spektrofotometricky při 570 nm.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

11. Zchutňovadla

11.1. Stanovení obsahu sacharinu

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu sacharinu v krmivech a premixech.
 Sacharin se extrahuje z vodného roztoku vzorku krmiva chloroformem a jeho obsah se stanoví metodou diferenční pulzní polarografie.

 Opakovatelnost

 Nezjištěna

12. Mikrobiotika

12.1. Stanovení počtu zárodků bakterií kmene Streptococcus

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení počtu zárodků kmene Streptococcus skupiny D v premixech a v krmných směsích.
 Stanovení počtu zárodků bakterií kmene Streptococcus se provádí na selektivních půdách podle Slanetze a Bartleye. Naočkované půdy jsou kultivovány při 37 stupních Celsia plus mínus 1 stupeň Celsia. Růst a počty kolonií se vyhodnocují po dvou a čtyřdenní kultivaci.

 Opakovatelnost

 Nestanovena

12.2. Stanovení počtu zárodků bakterií kmene Bacillus

 Účel, rozsah a princip

 Postup specifikuje podmínky pro stanovení počtu zárodků kmene Bacillus v premixech a v krmivech.
 Stanovení počtu zárodků bakterií kmene Bacillus se provádí po anaerobní kultivaci na krevním agaru při 37 stupních Celsia. Počty kolonií, charakteristické pro dané mikroogranismi, se vyhodnocují po 18 až 24 hodinách.

 Opakovatelnost

 Nestanovena