Příloha č. 6 k vyhlášce č. 471/2000 Sb.

STŘEDISKA PRO PŘENOS EMBRYÍ

Část I.
Technologické a hygienické postupy získávání, kultivace a uchovávání embryí,
vaječných buněk a přenosu embryí

1. Při získávání, kultivaci a uchovávání embryí se dodržují tyto zásady hygieny:
a)	všechny nástroje a média, které přicházejí do styku s dárkyní, embryi a příjemkyní jsou sterilní a jsou uzpůsobeny tak, aby se omezila možnost sekundární kontaminace,
b)	 produkty živočišného původu používané do vyplachovacích, kultivačních a zmrazovacích médií pocházejí ze zdrojů, které nepředstavují riziko pro zdraví zvířat, nebo jsou před použitím ošetřeny takových způsobem, který toto riziko vylučuje,
c)	 kontejnery pro uložení a transport embryí jsou před každým naplněním dezinfikovány,
d)	 tekutý dusík nebyl předtím použit pro jiné produkty živočišného původu.

2. Embrya se získávají zpravidla nechirurgickým výplachem děložních rohů dárkyně sedmý den po inseminaci. Výplach embryí se provádí v místě, které je možno snadno čistit.

3. Embrya se izolují, hodnotí, promývají a zpracovávají v místnosti izolované od místa výplachu. 

4. Embrya se vyhledávají stereomikroskopem a vyhledaná embrya se přenášejí mikropipetou do manipulačního média.

5. Embrya se hodnotí podle části II. této přílohy a poté se speciálně ošetřují
a)	mechanickými, 10 x opakovanými oplachy v kultivačním mediu; mezi jednotlivými oplachy se vymění mikropipeta a pro embrya každé dárkyně jsou použita nová média,
b)	metodou enzymatického ošetření, která je účinná při kontaminaci viry adherujícími na zonu pellucidu, jejíž součástí je krátkodobé vystavení embryí působení trypsinu.

6. Embrya se uchovávají 
a) krátkodobě tak, že
1.	po vyhledání, hodnocení a dekontaminaci se přemisťují do 2 cm^3 kultivačního media,
2.	uchovávají se při pokojové teplotě,
3.	před přenosem se plní do označených pejet o průměru 2,4 mm,
b) dlouhodobě tak, že
1.	ve zmrazovacím médiu v pejetách se vkládají do zmrazovače,
2.	zmrazovací režim je dán použitým médiem,
3.	při dosažení teploty nejméně -30 °C se pejety přenesou do tekutého dusíku.
c) vitrifikací

7. Před rozmrazením se pejeta vyjme z tekutého dusíku, ponechá se na vzduchu asi 10 sekund a poté ponoří na 10 sekund do vodní lázně o teplotě 37 °C. Vymývání glycerinu se provádí ve 3 stupních pomocí sacharózy. Přenos je nutno provést ihned po rozmrazení a vymytí glycerinu. Při použití etylenglykolu je nutno provést přenos ihned po rozmrazení.

8. Přenos embryí se provádí nechirurgicky speciální aparaturou, která umožňuje provést přenos hygienicky, lehce, atraumaticky. Při přenosu embryí se dodržují hygienické podmínky.

9. Vaječné buňky se získávají z ovarií odporažených dárkyň “post mortem” nebo metodou OPU punkcí ovariálních folikulů od žijících dárkyň. Vaječné buňky se používají v rámci programu in vitro produkce embryí. Embrya vyprodukovaná v podmínkách in vitro se hodnotí a uchovávají stejně jako embrya vzniklá in vivo.

Část II.
Postupy hodnocení kvality embryí a vaječných buněk

1. Orientační posouzení kvality embryí se provádí mikroskopicky již při jejich vyhledávání. K dalšímu použití se určují pouze embrya, která odpovídají stupněm vývoje délce postovulačního období.

2. Embrya se po zhodnocení zařadí do kvalitativních skupin. Morfologicky nejkvalitnější embrya jsou vhodná ke zmrazování, embrya se zastaveným vývojem a dalšími abnormalitami se vyřazují.

3. Pejety se zmrazenými embryi nebo jejich zátky se popisují (pejety směrem od zavařeného konce). Při popisu se uvádí
a) číslo pejety, které se přenáší z deníku zmrazování embryí,
b) číslo přenosového týmu (veterinární registrační číslo),
c) značka plemene (alfabetické označení),
d) matka embrya, (devítimístné číslo ušní známky), 
e) otec embrya, (značka registru a číslo registru),
f) den, měsíc, rok zmrazení, přičemž každý údaj je dvojmístný,
g) počet embryí v pejetě (v případě přímého přenosu se zmrazuje v pejetě vždy jen jedno embryo).

Část III.
Požadavky na technické a přístrojové vybavení střediska pro přenos embryí

laboratoř | zdroje teplé vody, destilovaná voda, sterilizátor, chladnice a mraznice, vodní lázeň na medium, stereomikroskop se spodním osvětlením
zařízeni pro čištění, sterilizaci a desinfekci |
místnost pro kontejnery se zmrazenými embryi | přepravní nádoby na dusík, polystyrénově, nádoby na dusík a zmrazovače embryí
další pomůcky a zařízení potřebná pro výplach, hodnocení, uchovávání a přenos embryí | zejména vyplachovací FOLEYE a katetry, vyplachovací, manipulační, kultivační, zmrazovací a vymývací medium, pejety, přenosné aparatury s krytem, desinfekční prostředky

Část IV.
Druh záznamů o přenosu embryí a vaječných buněk
a způsob jejich předávání osobě pověřené vedením ústřední evidence

1. Osoba oprávněná k přenosu embryí vede záznamy
a) přenosových týmů, 
b) dárkyň,
c) příjemkyň,
d) zmrazených embryí,
e) prodeje a vývozu embryí.

2. Tyto záznamy předává osoba oprávněná k přenosu embryí osobě pověřené vedením ústřední evidence v rozsahu a v termínech stanovených touto osobou.